Comment choisir la bonne colonne ?

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Date:2021-11-04 17:32:46 Thursday

Summary: ① Matrice de garnissage de la colonne chromatographique A. Matrice de gel de silice : haute pureté, faible coût, haute résistance, modification chimique facile, mais la plage de pH est limitée. La plupart des charges de matrice de silice sont ......

① Matrice de garnissage de la colonne chromatographique
A. Matrice de gel de silice : haute pureté, faible coût, haute résistance, modification chimique facile, mais la plage de pH est limitée. La plupart des charges de matrice de silice sont stables entre pH 2 et 8, mais la phase liée au gel de silice spécialement modifié peut être stabilisée à pH 1,5-10.
B. Matrice polymère: large plage de pH d'application, température stable (la température élevée peut atteindre plus de 80 degrés) et faible résistance mécanique.
②Forme des particules
La plupart des charges HPLC modernes sont des particules sphériques, mais parfois des particules irrégulières. Les particules sphériques offrent une pression de colonne plus faible, une efficacité et une stabilité de colonne plus élevées et une durée de vie plus longue de la colonne. Lors de l'utilisation d'une phase active à haute viscosité; les particules irrégulières ont une surface spécifique plus grande et un prix relativement bas.
③Taille des particules
Plus la taille des particules est petite, plus l'efficacité et la résolution sont élevées, mais en même temps, cela entraînera une chute de pression de la colonne plus élevée. Choisissez un matériau d'emballage de 1,5 à 3 μm pour résoudre certains échantillons complexes, UPLC peut utiliser un emballage de 1,5 μm; un autre garnissage d'une granulométrie de 10 μm ou plus est utilisé comme colonne semi-préparative ou préparative.
④Teneur en carbone
La teneur en carbone d'une colonne chromatographique fait référence au rapport de la phase liée à la surface du gel de silice, qui est lié à la surface spécifique et à la couverture de liaison. La haute teneur en carbone améliore la capacité de la colonne, la résolution et le temps d'analyse, et est utilisée pour les échantillons complexes qui nécessitent une haute résolution ; une faible teneur en carbone a un temps d'analyse court et présente une sélectivité différente, et est utilisé pour l'analyse rapide d'échantillons simples et de phases actives à haute teneur en eau. Conditionner les échantillons. Généralement, la teneur en carbone du C18 varie de 7 à 19 %.
⑤ Taille des pores et surface spécifique
Le milieu d'adsorption HPLC est constitué de particules poreuses et la majeure partie de la surface de réaction se trouve dans les pores. Par conséquent, les molécules doivent pénétrer dans les pores pour être adsorbées et séparées.
La taille des pores de la colonne chromatographique et la surface spécifique sont deux concepts complémentaires. La taille des pores est petite et la surface spécifique est grande, et vice versa. Grande surface spécifique, augmente la réaction entre l'échantillon et la phase liée, augmente le stockage, le chargement de l'échantillon et la séparation des composants complexes ; petite surface spécifique, temps d'équilibrage rapide, adapté à l'analyse de gradient.
⑥ Volume des pores et résistance mécanique
volume poreux, également appelé "volume poreux". Fait référence à la taille du volume de vide par particule. Il peut bien refléter la résistance mécanique de la charge. Les charges à grand volume poreux ont une résistance mécanique légèrement plus faible que celles à petit volume poreux. Les charges avec un volume de pores de 1,5 ml/g ou moins sont principalement utilisées pour la séparation HPLC, tandis que les charges avec un volume de pores supérieur à 1,5 ml/g sont utilisées pour la chromatographie d'exclusion stérique et la chromatographie basse pression.
⑦ embout
Le coiffage des extrémités de colonne peut réduire les pics de queue des composés basiques polaires en raison de l'interaction avec les groupes silanol exposés. La phase greffée non bloquée aura une sélectivité différente par rapport à la phase greffée bloquée, en particulier pour les échantillons polaires.