Summary: Après qu'un laboratoire a obtenu une nouvelle lignée cellulaire, la lignée cellulaire doit d'abord être cultivée et développée, puis congelée. La cryoconservation des cellules peut d'abord être utilisée comme sauvegarde lo......
Après qu'un laboratoire a obtenu une nouvelle lignée cellulaire, la lignée cellulaire doit d'abord être cultivée et développée, puis congelée. La cryoconservation des cellules peut d'abord être utilisée comme sauvegarde lorsque des cellules sont perdues en raison de la pollution et d'autres conditions. De plus, presque toutes les cellules subissent un certain degré de variation au cours du processus de culture et de passage. Afin de maintenir la cohérence des résultats expérimentaux, les cellules ne peuvent généralement pas être cultivées pendant des dizaines de générations. S'il est réutilisé, il est nécessaire de décongeler et de cultiver les cellules cryoconservées, moins passées avant utilisation.
Il y a quatre points principaux dans le processus de congélation des cellules : la récolte des cellules, l'utilisation d'agents protecteurs, la vitesse de congélation et l'environnement de stockage.
Récolte de cellules
Les cellules utilisées pour la cryoconservation sont généralement sélectionnées lorsque les cellules sont confluentes à environ 90 %. A ce moment, la croissance cellulaire est bonne et le nombre de cellules est important, et le milieu de culture doit être changé 24 heures avant de récolter les cellules. La méthode de récolte des cellules pour la cryoconservation est la même que d'habitude. Centrifuger à 100xg pendant 5 minutes pour recueillir les cellules et les remettre en suspension. Les cellules vivantes sont comptées. Diluer ou concentrer jusqu'à deux fois la concentration cellulaire finale pour la conservation des cellules (généralement 4 à 10 millions de cellules/ml), ajouter un volume égal de la solution de mélange d'agents protecteurs du milieu de culture qui a été préparée, mélanger doucement et aliquoter dans le tube de cryoconservation, cryoconservation.
Utilisation d'agents protecteurs.
Dans la cryoconservation cellulaire, le DMSO est généralement utilisé comme agent protecteur. Dans la cryoconservation cellulaire, la concentration finale de DMSO utilisée est généralement de 5 à 15 %. La concentration de DMSO dans la solution de cryoconservation d'une cellule spécifique peut être trouvée auprès de l'ATCC. Pour les cellules particulièrement sensibles, en particulier les cellules d'hybridome, il peut être préférable d'utiliser 95 % de sérum et 5 % de DMSO lors de la cryoconservation. Lors de l'utilisation de l'agent protecteur, utilisez un milieu de culture ou un sérum pour obtenir le double de la concentration finale, puis mélangez-le avec un volume égal de milieu de culture cellulaire en suspension. Taux de congélation des cellules
La vitesse de congélation des cellules est mieux contrôlée pour laisser suffisamment de temps aux cellules pour se déshydrater sans être endommagées par une déshydratation excessive. Pour la plupart des cellules, une chute de température de 1 à 3°C par minute est appropriée. L'opération habituelle est de mettre les cellules à -20°C pendant 1-2 heures, puis de les mettre au réfrigérateur à -80°C pendant la nuit (s'il n'y a pas de réfrigérateur à -80°C, vous pouvez utiliser de la neige carbonique à la place), et puis transférer dans le réservoir d'azote liquide ou en dessous de -130 Stockage à long terme au réfrigérateur à ℃.
Environnement de stockage
La température de stockage à long terme des cellules est de -130 ℃ ou moins. La température de la couche gazeuse dans le réservoir d'azote liquide est comprise entre -140℃ et -180℃. Les cellules peuvent être stockées dans la couche gazeuse ou immergées dans de l'azote liquide. Si possible, il est préférable de stocker dans la couche gazeuse, car cela peut empêcher l'azote liquide de pénétrer dans le stockage de congélation. Le tube provoque une explosion lorsque les cellules sont retirées (mais de cette façon, seule une petite quantité d'azote liquide peut être stockée dans le réservoir d'azote liquide, qui doit être ajouté fréquemment). Les cellules peuvent également être conservées au réfrigérateur à -80℃ pendant quelques mois environ.
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