Réponses aux questions fréquemment posées sur la culture cellulaire

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2022-07-14 16:15:00 Thursday

Summary: 1. Si je reçois un flacon de cellules congelées, puis-je le stocker directement dans de l'azote liquide ? Dans de nombreux cas, les cellules expédiées sur de la neige carbonique (-80°C) peuvent être replacées dans de l'azote liquide......

1. Si je reçois un flacon de cellules congelées, puis-je le stocker directement dans de l'azote liquide ?
Dans de nombreux cas, les cellules expédiées sur de la neige carbonique (-80°C) peuvent être replacées dans de l'azote liquide puis rapidement décongelées. Cependant, un tel traitement peut réduire la viabilité cellulaire. Pour certaines lignées cellulaires sensibles, cela peut rendre la récupération cellulaire plus difficile. On pense que ce phénomène est dû à des changements dans la structure des cristaux de glace intracellulaires dus aux changements de température. Par conséquent, il est recommandé que les cellules soient décongelées et cultivées dès que possible après réception. Il est préférable de réduire le temps de stockage à -80°C, de préférence cette température n'est utilisée que pour l'expédition.

2. Pourquoi les cellules devraient-elles être stockées en phase gazeuse au lieu de la phase liquide dans un réservoir d'azote liquide ?
Les cellules sont stockées dans une phase d'azote liquide pour une récupération plus facile. Dans la phase liquide de l'azote liquide, si le cryotube n'est pas correctement scellé ou fuit, les cellules sont en contact direct avec l'azote liquide, ce qui affectera la viabilité des cellules après décongélation.

3. Comment changer le milieu des cellules en suspension ?
Les cellules en suspension peuvent être cultivées en ajoutant simplement du milieu frais (si l'espace le permet) ou en détachant les cellules de l'ancien milieu par centrifugation (100 g pendant 5 min), puis en remettant en suspension les cellules granulées dans du milieu frais. Cependant, pour la plupart des lignées cellulaires en suspension, le simple ajout de milieu est une meilleure approche. L'une ou l'autre méthode nécessite que le milieu soit rafraîchi avant que les cellules n'atteignent leur densité de saturation maximale. La densité de saturation des cellules est comprise entre 3 x 10 5 et 2 x 10 6 selon la lignée cellulaire et les conditions de culture (repos ou agitation, niveau d'oxygénation...).

Les cellules doivent être diluées pour réduire les concentrations cellulaires afin de permettre une récupération suffisante des nutriments pour maintenir les cellules en croissance logarithmique. Si le milieu est simplement changé sans réduire la densité cellulaire, les cellules épuiseront rapidement le milieu et mourront. Si les cellules sont diluées en dessous de leur densité minimale, elles entreront dans une phase de latence, se développeront très lentement ou mourront. Chaque lignée cellulaire en suspension a une densité de saturation et un intervalle de passage différents, de sorte que le comptage quotidien des cellules est le meilleur moyen de surveiller une lignée cellulaire en suspension.