Comment nettoyer et régénérer la colonne après contamination ?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: Lorsqu'une colonne chromatographique est contaminée, son comportement chromatographique sera quelque peu différent de celui d'une colonne non contaminée. Des colonnes contaminées peuvent causer des problèmes de contre-pression. La colon......

Lorsqu'une colonne chromatographique est contaminée, son comportement chromatographique sera quelque peu différent de celui d'une colonne non contaminée. Des colonnes contaminées peuvent causer des problèmes de contre-pression. La colonne en phase inverse contaminée doit être nettoyée et régénérée pour restaurer les conditions de fonctionnement d'origine.
La clé pour régénérer une colonne HPLC contaminée est de connaître la nature du contaminant et de trouver un solvant approprié pour l'éliminer. Si la contamination est causée par l'accumulation de substances fortement retenues lors d'injections répétées, des étapes simples pour éliminer ces contaminants peuvent souvent restaurer le comportement chromatographique. Parfois, après de nombreuses opérations, la colonne chromatographique est lavée avec 90 à 100 % de solvant B (le solvant le plus fort dans le système à phase inverse à deux solvants) pendant 20 volumes pour éliminer les contaminants. Par exemple, des solvants non aqueux tels que le méthanol, l'acétonitrile et le tétrahydrofuranne peuvent être utilisés pour les lipides résiduels dans la colonne.

D'une manière générale, toutes les méthodes de nettoyage ont des formes similaires. Les solvants utilisés augmentent avec la force du solvant. Souvent, le dernier solvant est très hydrophobe (comme l'acétate d'éthyle ou même un hydrocarbure) et peut être utilisé pour dissoudre des substances non polaires telles que des lipides et des huiles. Nous devons nous assurer que chaque solvant d'une série de solvants peut être mélangé avec le solvant suivant.
À la fin du processus de nettoyage, il est nécessaire de revenir au système de solvant d'origine à l'aide d'un solvant miscible de force moyenne. Par exemple, l'isopropanol est un très bon solvant comme étape intermédiaire car il est miscible avec le n-hexane ou le dichlorométhane ainsi qu'avec les solvants en phase aqueuse. Cependant, la viscosité de l'isopropanol est très élevée et un faible débit doit être assuré pour éviter une pression de pompe excessive. Lors du rinçage de la colonne chromatographique, le liquide de rinçage est directement connecté à la bouteille de déchets à partir de l'extrémité de sortie de la colonne chromatographique et ne peut pas s'écouler à travers la cellule de détection pour éviter la contamination de la cellule de détection.
La colonne chromatographique en phase inversée n'utilise pas de solution tampon, veuillez utiliser les séries de solvants suivantes pour régénérer :
100 % méthanol → 100 % acétonitrile → 75 % acétonitrile-25 % isopropanol → 100 % isopropanol → 100 % chlorure de méthylène → 100 % n-hexane → 100 % chlorure de méthylène → 100 % isopropanol → 100 % acétonitrile .
La colonne de chromatographie en phase inverse utilise une solution tampon, veuillez utiliser la série de solvants suivante pour régénérer :
eau → acétonitrile → chloroforme (ou isopropanol) → acétonitrile → eau.